Diabetologia：激活但功能毁坏的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失肝细胞自身抗形体到消失1改进型肝炎临床研究成果疼痛的困难重重所部在成人时期就有很差的揭示，多个肝细胞自身抗形体阴性的成人中都有70%在肝细胞素转换后10短期内复发肝炎，而随访15年的成人这一比率缩减到84%。相比之下之下，占临床研究成果1改进型肝炎一半以上的改进型1改进型肝炎的复发机制还没有取得充分的研究成果。

更加多的人开始采用已确定系统来并不一定1改进型肝炎的困难重重：个形体在消失多种肝细胞自身抗形体时进入第1阶段，消失血压异常时进入第2阶段，消失疼痛时进入第3阶段。一些多发肝细胞自身抗形体阴性的个形体，在1期和2期，困难重重较极快，并的发展为复发的1改进型肝炎。我们之前揭示了一两组在首次验证到多种肝细胞自身抗形体取样后至不及10年无肝炎的想像中极快困难重重者，这两组高血压000人不及，但不同之处非常具体。随后，我们发现肝细胞自身肝细胞依赖性CD8+T受体质重排在困难重重快速的高血压中都基本不假定，但在早先复发和长期假定的肝炎高血压中都很容易验证到。这确实表明，与困难重重高血压相比之下，这些高血压自身免疫重排的调节进一步提高。

以前研究成果表明，尽管调节性T受体质(Treg)数量正常，但肝炎高血压假定一些功能弱点，其中都有数对IL-2的重排能力降低。此外，肝炎高血压中都的现象CD4+T受体质确实对调节非常具抵抗性，平庸为现象T受体质的抑制作用消散，自然导致的Treg和形排泄导致的其会Treg，以及肝细胞年中的CD4+T受体质中都IL-2重排消散。本研究成果的借以是揭示了CD4+调节性T受体质(Treg)在一小群想像中快速困难重重者中都的不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

深入研究方法：BOX研究成果是一项以年轻人辅以的横向研究成果，在21岁都有确诊的高血压亲属中都核对1改进型肝炎的生命危险因素所。我们之前揭示了长期快速困难重重者的不同之处，他们保持多重肝细胞自身抗形体阴性多达10年，但没有消失肝炎的临床研究成果疼痛，极快性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名暂时保持无肝炎并愿意缺不及大量血液取样的快速困难重重者扩及T和B受体质功能深入研究。在现在的研究成果中都，8名极快困难重重者(SP两组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此之间的肝细胞自身抗形体阴性。所有的与会者都所处1改进型肝炎困难重重的1期，尽管一些人随后失掉了肝细胞自身抗形体对某些肝细胞的阴性重排，然而，一名高血压早就所处2期至不及6年，但没有消失临床研究成果疼痛，一名高血压被诊断为肝炎，该受试者72岁，在采自实验取样时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在数据深入研究中都对该供形体顺利完成了直接评估。转化外周血单个核受体质(PBMCs)，采用多数值流式受体质练成和T受体质抑制作用试验性评估供形体中都Treg的频所部、表改进型和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利完成无统筹聚类深入研究，评估Treg表改进型。

结果：与卫生供形体相比之下，来自极快困难重重形体的清醒CD4+T受体质的统筹聚类看出，触发的清醒CD4+ Treg频所部缩减，与止痛药其会的TNFR相关受体(GITR)传达缩减有关。一名HbA1c升温的高血压与困难重重快速者和匹配的印证两组相比之下，Treg谱有所不同。功能深入研究表明，与卫生供形体相比之下，来自快速困难重重形体的Treg介导的CD4+现象T受体质抑制作用明显受损。平庸为对现象CD4+T受体质CD25和CD134传达的抑制作用缩减。

三幅1 深入的表改进型深入研究看出，CD4+Treg亚改进型在极快困难重重表头中都缩减。由FlowSOM降解的Treg二楼，汇聚在来自所有供形体的活CD4+CD45RA -受体质上。根据上面物传达鉴定显现出10个元簇:清醒T受体质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T受体质;HLA-DR + GITR +清醒T受体质;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)采用9个不同Treg上面降解的10个元簇的MST。每个节点代表人一个空降兵(100个空降兵)，非常大的元空降兵(10个元空降兵)在节点两组外围上色。每个节点中都的年糕三幅对此单个上面的传达级别。(b)每个元聚类的热三幅，以看出整形体上面传达。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)降解三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说数量级为每个metacluster盒新线三幅(数量级> 0.05%)确定为HD和SP两组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T受体质(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T受体质(l)。紫色左上角代表人理应以SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 采用CITRUS的预测模改进型证实，Treg频所部的缩减是困难重重快速的标志。基准介导(a - f)和柑橘深入研究(g-k)非常SP与会者和匹配的HD与会者在CD4+CD45RA−T受体质上的不同。(a)基因型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的代表人性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利完成转化，模拟FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)两组以及供形体SP 606(紫色)中都CD25+ cd127的频所部汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导兄集的盒新线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)木瓜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头突显现出的簇被识别为SP和HD表头彼此之间的不同。(j)盒新线三幅看出了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组中都，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对来说数量级(比率)。(k)灰度看出每个簇的表改进型(红色)和Treg上面相对来说传达与背景传达(红色);上列，缓存Treg_3;下面一行，缓存Treg_4。背景与所有其他簇中都上面的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与卫生献血者相比之下，困难重重快速者清醒treg的GITR缩减。每个清醒CD4+T受体质元簇(清醒T受体质_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T受体质;HLA-DR + GITR +清醒T受体质;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个传达上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的传达热三幅(sp606不有数在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇中都所有HD(紫色)、所有SP(红色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR传达串联，看出灰度(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有供形体有数，p< 0.05(红色)供形体SP 606和匹配的HD不有数在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR传达，从基准介导，从所有HD(紫色)、所有SP(红色)和SP 606(紫色)串联，看出灰度(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自快速困难重重的CD4+ treg受体质控制现象CD4+T受体质的能力降低。SP两组用红色的新线和左上角对此，HD两组用黑色的新线和左上角对此，紫色的新线/左上角对此供形体sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T受体质顺利完成分选。CD4+CD25−(应以答者)被上面为CFSE, Treg按观察的比率高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再造受体质，培育显现出3同月顺利完成流式受体质练成验证。(a-d)与CD4+应以答者相对来说应以的treg培育显现出(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应以答者培育显现出。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE抑制作用总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用总和。采用阴性印证(触发的叛离以受体质内含treg)计算抑制作用总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

三幅5 现象CD4+T受体质对快速困难重重的T受体质再造的抑制作用非常脆弱。SP两组用红色的新线和左上角对此，HD两组用黑色的新线和左上角对此，紫色的新线/左上角对此供形体sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T受体质顺利完成分选。CD4+CD25−(应以答者)被cfsel上面，treg按观察的比率高锰酸钾。用抗CD3 /28微珠再造受体质，培育显现出3同月顺利完成流式受体质练成(CD25反染)和受体质因兄深入研究。HD Treg与HD、SP或sp606应以答者共同培育显现出。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE抑制作用百分所部(b)。(c,d) CD25抑制作用百分所部(c)和CD134抑制作用百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育显现出中都的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差深入研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重非常测试

假设：我们得显现出的假设是，来自快速困难重重兄的再造清醒CD4+Treg在GITR传达中都取得了适配和丰沛，忽视了进一步研究成果Treg在1改进型肝炎确实性个形体中都的异质性的必要。

原文显现出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28